论著
O-GlcNAc糖基化对Nalm-6细胞生物学行为及依托泊苷诱导凋亡的影响
中华血液学杂志, 2017,38(3) : 237-242. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2017.03.012
摘要
目的

研究O连接的N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化及乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)对Nalm-6细胞生物学行为及对依托泊苷(Vp16)诱导凋亡的影响。

方法

利用OGT抑制剂Alloxan构建低O-GlcNAc修饰的Nalm-6细胞模型,CCK-8法检测Alloxan对细胞增殖的影响,流式细胞术检测Alloxan对细胞凋亡及细胞周期的影响;以不同浓度的Vp16处理Nalm-6细胞12 h,Western blot检测O-GlcNAc糖基化修饰程度及OGT表达量的变化;以Alloxan处理Nalm-6细胞24 h后再加入Vp16(5 μg/ml)处理12 h,应用流式细胞术检测不同组别细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况。

结果

随着Vp16浓度的增加,Nalm-6细胞O-GlcNAc修饰及OGT表达均逐渐上调(P<0.05);Alloxan可抑制Nalm-6细胞增殖,诱发Nalm-6细胞凋亡[(15.190±2.539)%对(21.910±4.105)%,P=0.007],阻滞细胞周期[G1期:(43.534±4.453)%对(57.322±6.091)%,P=0.003;S期:(50.747±5.937)%对(37.201±4.661)%,P=0.001];Alloxan可抑制Vp16诱导的Nalm-6细胞凋亡[(75.195±13.845)%对(52.741±10.815)%,P=0.011],并伴随Bax表达下调(5.496±1.998对2.950±0.703,P=0.015)、Bcl-2表达上调(0.454±0.125对0.803±0.223,P=0.013)。

结论

通过抑制OGT而改变Nalm-6细胞O-GlcNAc修饰程度可影响其增殖、凋亡、改变细胞周期并抑制Vp16诱导的细胞凋亡。

引用本文: 张冰, 李栋, 时庆, 等.  O-GlcNAc糖基化对Nalm-6细胞生物学行为及依托泊苷诱导凋亡的影响 [J]. 中华血液学杂志,2017,38( 3 ): 237-242. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2017.03.012
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O连接的N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化是由Zachara和Hart首次发现的一种重要的蛋白质翻译后修饰[1]。O-GlcNAc糖基化是一个动态可逆的过程,由乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)负责糖基化,N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(OGA)负责去糖基化。在生物体内,O-GlcNAc糖基化控制基本的生命过程,例如蛋白质的合成、染色质的结构、DNA脱甲基化以及生物昼夜规律。AKT[2]等信号蛋白以及c-Myc[3]、p53[4]、NF-κB[5]等转录因子都存在O-GlcNAc糖基化修饰。近年来,大量研究证实O-GlcNAc糖基化蛋白在乳腺癌[6]、前列腺癌[7]、膀胱癌[8]等多种肿瘤中发挥重要作用,但并没有在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)以及其耐药方面中进行相关研究。本研究选用B-ALL细胞株Nalm-6细胞作为主要研究对象,从糖生物学角度分析O-GlcNAc糖基化及相关酶OGT在B-ALL发展及对依托泊苷(Vp16)诱导凋亡方面的作用,并初步探讨其作用机制。

 
 
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依托泊苷
Nalm-6细胞
O-GlcNAc
糖基化
乙酰氨基葡萄糖转移酶