论著
脐血单个核细胞体外诱导分化为粒系细胞的研究
中华血液学杂志, 2017,38(06) : 532-536. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2017.06.013
摘要
目的

探索脐血来源单个核细胞体外诱导分化为粒系细胞的方法。

方法

采用羟乙基淀粉沉降红细胞,淋巴细胞分离液分离单个核细胞。选择不同的培养基、添加剂以及培养模式诱导粒系细胞分化,显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表型,免疫荧光测定粒系细胞CD18表达,并检测细胞吞噬功能。

结果

采用X-VIVOTM15中添加细胞因子TPO、SCF、G-CSF诱导粒系细胞,细胞存活率、细胞数、粒系细胞分化效率均优于添加胎牛血清组。与SCGM培养基诱导粒系细胞相比,X-VIVOTM15培养基效果更佳,且成本低。采用造血干细胞扩增和在基础培养基X-VIVOTM15中添加细胞因子TPO、SCF、G-CSF诱导粒系细胞的两阶段扩增、诱导模式,21 d细胞扩增倍数近132倍;流式细胞术检测表明,粒系细胞分化效率滞后于直接诱导模式,粒系标志CD15表达分别为(69.60±1.06)%和(97.73±0.39)%;瑞氏-吉姆萨染色可见成熟的分叶核粒细胞;免疫荧光方法检测显示溶酶体蛋白CD18的表达;成熟的粒细胞具有较强吞噬墨汁的功能,吞噬效率为(51.43±0.05)%。且在细胞趋化因子IL-8作用下,粒细胞具有趋化作用。

结论

优化了诱导粒系细胞培养体系和培养模式,获得了具有一定功能的粒系细胞。

引用本文: 陈琳, 谢小燕, 聂纪芹, 等.  脐血单个核细胞体外诱导分化为粒系细胞的研究 [J]. 中华血液学杂志,2017,38( 06 ): 532-536. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2017.06.013
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粒系细胞是血液非特异性免疫系统的重要组成部分,特别是中性粒细胞,在非特异性免疫应答中执行重要的生理功能。粒细胞缺乏常导致头晕、乏力,此外还可出现严重感染症状,感染部位以肺、尿路、皮肤等多见,易发生脓毒血症或败血症,病死率可达25%。中性粒细胞减少症是由于外周血中性粒细胞数量减少而产生的综合征,是肿瘤治疗中最常见的并发症,在接受化疗的实体肿瘤患者中发生率为10%~20%,院内的病死率达到9.8%。尽管重组G-CSF可通过促进人造血干细胞向粒系分化,从而发挥预防中性粒细胞减少症的作用,但其治疗效果并不明显。对于抗生素治疗无效而感染风险极高的粒细胞减少症,需通过移植粒细胞的方法进行治疗。CD34+造血干细胞诱导、分化为粒细胞的研究多有报道[1,2]。本研究我们探索脐血来源的单个核细胞体外诱导粒系细胞的最佳培养体系和培养模式,以期为临床应用治疗粒细胞减少症奠定实验基础。

 
 
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单个核细胞
粒系细胞
胎血