论著
慢病毒介导的RNA干扰下调TSC2表达对白血病U937细胞系的影响及作用机制
中华血液学杂志, 2017,38(07) : 612-617. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2017.07.012
摘要
目的

研究下调TSC2基因表达对白血病U937细胞系的生物学作用及其对mTOR通路活性的影响。

方法

选择TSC2高表达的U937细胞系,通过慢病毒介导的RNA干扰技术下调TSC2基因表达;采用CCK-8比色法、细胞集落形成实验和流式细胞术检测其对细胞增殖、分化和凋亡的影响;采用Western blot法和实时荧光定量PCR(RQ-PCR)法检测TSC2表达下调对mTOR通路蛋白表达及活性的影响。

结果

TSC2基因表达降低能够促进U937细胞的增殖和集落形成(P<0.05);能够使U937细胞G1期[(52.53±3.75)%对(75.10±4.33)%,t=6.829,P=0.002]比例明显降低,G2/M期[(22.43±1.00)%对(15.47±1.20)%,t=-5.581,P=0.019]、S期[(25.03±4.34)%对(14.33±0.91)%,t=-5.413,P=0.013]比例升高;对细胞分化和细胞凋亡没有明显影响(P>0.05)。TSC2基因表达下调后,mTOR活性升高,磷酸化的4EBP1和S6K1蛋白活性升高,而AKT蛋白活性没有明显变化;与细胞增殖相关的基因cyclin D1、c-myc表达升高,PTEN基因表达升高,P27KIP基因和凋亡相关基因BCL-XL的表达没有明显的改变。

结论

TSC2基因表达下调可以通过调节mTOR通路活性促进白血病细胞的增殖。

引用本文: 徐智芳, 刘海霞, 覃艳红, 等.  慢病毒介导的RNA干扰下调TSC2表达对白血病U937细胞系的影响及作用机制 [J]. 中华血液学杂志,2017,38( 07 ): 612-617. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2017.07.012
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信号转导通路的组成性激活能够增强急性白血病(AL)细胞的存活和增殖能力。TSC2-mTOR信号通路在控制细胞生长、增殖、存活和分化中有着重要的功能,其活化过程通过不同的上游信号机制调节,但最终聚焦于TSC1/TSC2复合体,通过发挥TSC2的GTP酶活化蛋白(GTPase-activating protein,GAP)活性抑制小G蛋白Rheb(Ras homologue enriched in brain)进而抑制哺乳动物雷帕霉素靶分子(mammalian target of rapamycin,mTOR)的活性[1]。有研究表明在AL细胞中mTOR常常被过度激活[2,3],而我们在前期研究中发现,TSC2基因在部分AL患者中表达降低[4]。由此提出假设:在AL细胞中,TSC2低表达与mTOR的异常激活及白血病的发生有关。本研究中我们通过构建慢病毒质粒,研究TSC2表达下调对白血病U937细胞的生物学作用及可能机制。

 
 
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基因,TSC2
mTOR
信号通路
白血病